Reagentes Comuns em Cultura de Células

Reagentes Comuns em Cultura de Células

Quando células ou tecidos animais deixam o corpo para serem cultivados fora do corpo, é necessário fornecer-lhes vários nutrientes necessários para o crescimento e vários reagentes necessários para um melhor crescimento celular in vitro. Nesta edição, apresentarei brevemente alguns componentes reagentes utilizados no processo de cultivo de células e suas funções.

1. Composição do meio de cultura celular

(1). Meio de cultura básico

Os meios basais comuns incluem principalmente MEM, DMEM e RPMI, que fornecem principalmente sistemas tampão, incluindo glicose, aminoácidos, água, oligoelementos e bicarbonato de sódio.

● Glutamina

É um aminoácido essencial necessário para o crescimento celular e participa da síntese de proteínas e do metabolismo de ácidos nucléicos.

● Indicador vermelho de fenol

Um indicador ácido-base comumente usado, mostra amarelo quando é ácido, vermelho quando é neutro e roxo quando é alcalino. O vermelho de fenol é usado como um indicador do valor de pH no meio.

● Sistema tampão de carbonato/PH

Um sistema tampão de pH fisiológico. Devido à produção de ácido durante o metabolismo celular, o HCO3- no meio será gradualmente consumido, de modo que o CO2 precisa ser reabastecido a tempo de manter o pH dentro de uma determinada faixa.

(2).Soro animal

Adicione 2%-20% de soro ao meio basal para formar um meio completo. O soro pode não apenas fornecer às células os nutrientes básicos necessários para o crescimento, mas também conter componentes importantes envolvidos no metabolismo celular, como fatores de crescimento, hormônios, oligoelementos e íons.

(3). antibióticos

Para evitar que as células sejam contaminadas durante o processo de cultivo, costuma-se adicionar ao meio completo uma mistura de penicilina-estreptomicina, ou seja, um anticorpo duplo. A penicilina é eficaz principalmente contra bactérias Gram-positivas, e a estreptomicina é eficaz contra muitas bactérias Gram-negativas. .

2. Tripsina-EDTA

A tripsina pode hidrolisar a proteína entre as células e depois separar as células. O EDTA é um agente quelante químico com baixa toxicidade e tem um efeito discreto nas células aderentes. Quando os dois são usados em combinação, a eficiência das células de dispersão é maior. Esta etapa é chamada de células digestivas. Para células diferentes, existem requisitos diferentes para temperatura, tempo e concentração de tripsina quando usada. Se a digestão for insuficiente, as células não podem ser digeridas e a digestão excessiva causará danos às células. Uma vez que o soro no meio pode reduzir a atividade da tripsina, o meio completo é geralmente usado para terminar a digestão celular.

3. Tampão PBS

PBS é uma solução salina tamponada com fosfato com balanço salino e efeito tampão de pH ajustável. Geralmente é usado para lavar células e manter a pressão osmótica celular.

4. Dimetil sulfóxido (DMSO)

Um importante protetor celular penetrante e um componente importante no fluido de criopreservação celular. Durante o processo de criopreservação das células, o DMSO pode penetrar rapidamente na membrana celular e entrar na célula, diminuir o ponto de congelamento, retardar o processo de congelamento, aumentar a concentração de íons na célula, reduzir a formação de cristais de gelo na célula e reduzir a dano.

5. Inibidores de micoplasma

A contaminação por micoplasma é uma fonte comum de contaminação no processo de cultura de células. No entanto, os inibidores de micoplasma podem ser usados para eliminar o micoplasma no fluido celular no estágio inicial de contaminação, para que o experimento possa continuar.

6. Corante azul de tripano

Um reagente de coloração biológica comumente usado para detectar a integridade da membrana celular. Devido à perda da integridade da membrana celular e ao aumento da permeabilidade, as células mortas podem ser coradas de azul pelo azul de tripano, enquanto as células vivas não serão coradas porque possuem membranas celulares intactas que podem excluir a entrada do azul de tripano na célula. As células vivas e mortas podem ser distinguidas pela cor da célula sob um microscópio, o que é conveniente para a contagem de células vivas.