Guia do Utilizador do Frasco de Cultura Celular

I. O que é um Frasco de Cultura Celular?

Um frasco de cultura celular é um instrumento de laboratório comum utilizado para o cultivo de células. É fabricado em poliestireno (PS) de alta qualidade, fabricado com recurso a moldes de ultraprecisão e processos de produção totalmente automatizados. O produto é utilizado para o cultivo de células em laboratório; as suas excelentes propriedades óticas facilitam a observação microscópica, e a superfície recebe tratamento térmico para uma melhor adesão celular.

II. Inoculação da Suspensão Celular no Frasco de Cultura

1. Mistura da Suspensão Celular: Prepare a suspensão celular de acordo com a concentração experimental necessária e misture-a completamente num frasco de cultura, recipiente de cultura ou outro recipiente.

2.Com recurso a uma pipeta ou pipeta Pasteur, injete a suspensão celular lenta e continuamente no frasco de cultura celular, evitando salpicos ou formação de espuma. (Para frascos de cultura celular multicamadas, deve ser dada especial atenção à distribuição uniforme do líquido; inclinar ou rodar o frasco pode ajudar a garantir um fluxo uniforme do líquido em cada camada.) 

3. Coloque cuidadosamente o frasco de cultura sobre uma superfície de trabalho estável, certificando-se de que o lado liso e plano está virado para cima e o lado inclinado para baixo (design empilhável para facilitar o manuseamento).

4.º Coloque o frasco de cultura celular numa incubadora adequada e ajuste a temperatura (por exemplo, 37 °C), a humidade e a concentração de gás (por exemplo, 5% de CO₂) adequadas.

5.º Deixe as células crescerem no frasco de cultura durante um período de tempo.

III. Troca do Meio de Cultura

1. Remoção do Meio de Cultura Antigo: Ao aspirar o meio de cultura, incline o frasco num ângulo de 45 graus com a superfície lisa virada para si. Aspire cuidadosamente o meio de cultura antigo utilizando uma pipeta Pasteur ou uma pipeta, tendo o cuidado de não desalojar as células aderentes. Se existirem muitas células em suspensão ou impurezas no meio de cultura, lave as células uma ou duas vezes com solução tampão PBS para remover estas impurezas.

2. Adição de Novo Meio de Cultura: Após remover o meio de cultura antigo, adicione uma quantidade adequada de meio de cultura ao frasco. Adicione o meio pela parede lateral do frasco para evitar o impacto direto nas células aderentes. Simultaneamente, a quantidade de meio de cultura fresco adicionada deve ser determinada com base na densidade celular e na taxa de crescimento para garantir um crescimento celular normal.

IV. Colheita de Células

1. Remoção do Meio de Cultura Antigo: Aspire cuidadosamente o meio de cultura antigo do frasco de cultura celular, adicione uma quantidade adequada de tampão PBS e agite suavemente para remover qualquer resíduo de meio de cultura, garantindo que a superfície celular está limpa.

2.º Digestão e Inativação das Células: Adicione uma quantidade adequada de tripsina (≥3 ml) para digestão durante 2 a 3 minutos e, em seguida, interrompa a digestão com meio de cultura contendo soro.

3.º Recolha de Células: Transfira a suspensão celular para um tubo de centrífuga utilizando uma pipeta (evitando a formação de espuma) e centrifugue a uma velocidade adequada (por exemplo, 800 rpm) durante 5 minutos para permitir que as células se depositem no fundo do tubo.

4.º Recolha do Precipitado Celular: Após a centrifugação, elimine cuidadosamente o sobrenadante do tubo de centrifugação (não elimine o precipitado celular). Recolha o precipitado celular do tubo de centrífuga e proceda ao processamento adicional necessário para a experiência.