Uso Correto de Incubadoras Anaeróbias

I. Operação: Criação de um Ambiente Anaeróbio

1. Ajuste da pressão de saída dos cilindros de nitrogénio misto e gás combinado: Ajuste a válvula redutora de pressão para aproximadamente 0,1 MPa.

2. Ligue o interruptor de alimentação e o controlador de temperatura, ajustando a temperatura desejada. A temperatura no interior da incubadora, na câmara de operação, pode ser selecionada e controlada livremente.

3.º Coloque os acessórios e equipamentos necessários de acordo com os requisitos de utilização e insira dois sacos de plástico não tóxicos na câmara de operação.

4.º Coloque 1000 g de grânulos de paládio seco (selados) e 500 g de dessecante, juntamente com um indicador anaeróbio (selado), na câmara de operação.

5.º Feche bem as portas interior e exterior da câmara de amostragem e verifique o vácuo.

6. Reposição secundária de azoto na câmara de operação:

(1) Introduza um tubo de borracha na entrada de ar da câmara de operação e a outra extremidade num saco de plástico.

(2) Ligue a entrada de nitrogénio, abra a válvula de controlo de nitrogénio, encha ambos os sacos de plástico com nitrogénio e feche bem as aberturas dos sacos.

(3) Coloque luvas de látex no anel de flange do painel de observação e feche-as bem.

(4) Liberte gradualmente o azoto dos sacos de plástico na câmara de operação até que todo o azoto seja libertado.

7. Reposição secundária de azoto na câmara de operação: Repita o processo de enchimento com azoto, tendo em atenção abrir e fechar a válvula de escape a qualquer momento.

8.º Troca Terciária de Gás Misto na Câmara Cirúrgica:

(Proporção de gás misto: N2 90%; H2 5%; CO2 5%).

(1) Altere o caudal de gás, abra a válvula de entrada de gás misto e abra e feche a válvula de escape em qualquer momento durante o enchimento.

(2) Após o gás misto encher as bolsas de plástico, feche a válvula de passagem direta do gás misto (válvula de três vias). 

(3) Liberte gradualmente o gás misto da bolsa plástica para a câmara cirúrgica.

(4) Após três renovações de ar, o teor de oxigénio na câmara cirúrgica será reduzido a vestígios.

9. Ligue o removedor de oxigénio com grânulos de paládio na câmara cirúrgica e ligue a fonte de alimentação ao dispositivo de desoxigenação catalítica de oxigénio. Após uma hora, observe a mudança de cor da fita indicadora de anaerobiose. Uma mudança de cor indica que a câmara cirúrgica atingiu um ambiente anaeróbico.

10. Ligue a lâmpada de esterilização ultravioleta para esterilizar a câmara. O tempo de esterilização é determinado pelo utilizador.

II. Posicionamento e Cultivo de Estirpes Bacterianas

1.º Verifique e feche a porta da câmara de amostragem.

2.º Abra a porta exterior da câmara de amostragem, coloque a estirpe bacteriana dentro da câmara e feche a porta.

3.º Realize três processos de purga e substituição de nitrogénio na câmara de amostragem: primeiro, evacue até um nível de vácuo de 500 mmHg (66 kPa) ou superior e, em seguida, abra manualmente a válvula de nitrogénio para permitir que o ponteiro volte a zero antes de avançar para a operação seguinte.

4.Se for selecionado um nível de vácuo inferior, o número de ciclos de substituição terá de ser aumentado. 

5. Após abrir e fechar as portas da câmara de amostragem, aplique um vácuo baixo de 100 mmHg (13 kPa) para inspeção e verificação.

6. Condições para o uso contínuo a longo prazo da incubadora anaeróbia:

(1) Observe diariamente a barra indicadora de anaerobiose na sala de operações. Se normal, pode continuar a ser utilizado. Se anormal, o ar deve ser substituído.

(2) Uma pequena quantidade de gás misto deve ser continuamente introduzida para garantir que o hidrogénio adicionado se combina com vestígios de oxigénio para absorção catalítica, mantendo um estado anaeróbio. A taxa de fluxo do gás misto deve ser de aproximadamente 10 ml por minuto.

(3) Substitua o exsicante a cada 3 dias de incubação contínua.

7. Aplicação do esterilizador de varetas de inoculação:

(1) Utilize um fio de aquecimento de níquel-cromo para curto-circuitar e aquecer até ficar em brasa para esterilização (da haste de inoculação).

(2) O ponto de fusão da cera pode ser colocado diretamente na haste de inoculação, e a abertura de vedação do tubo de ensaio pode ser rodada para derreter a cera.