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Verificação do efeito de esterilização da autoclave

2019-04-04 09:55:38
O esterilizador a vapor de alta pressão esteriliza os artigos para obter os requisitos de esterilidade, que é a garantia básica para experiências microbianas. A qualificação da esterilização em autoclave é o primeiro passo mais fundamental e crítico no sucesso do experimento. Exceto por uma pequena quantidade de meio, que só precisa ser aquecido e dissolvido, e nenhuma autoclavagem é necessária, a maior parte do meio é autoclavada a 121 ° C por 15-30 minutos. Em particular, a esterilização do meio de teste estéril não é completa e está diretamente relacionada aos resultados do teste de esterilidade na amostra. Portanto, o efeito de esterilização da autoclave deve ser verificado. Para isso, fornecemos um método simples e viável para verificar a eficácia da esterilização.

1. Material de teste

(1) papel Bacillus stearothermophilus (um conjunto de tubos de ensaio vendidos pela 3M Company também está disponível). Bacillus stearothermophilus.

ATCC7053 é uma bactéria indicadora biológica comumente usada neste método, contendo uma UFC de 5 células / comprimido.

(2) cartão indicador químico de esterilização a vapor a pressão de 121 ° C (também está disponível uma fita indicadora de esterilização comum).

(3) O meio aquoso purpura de bromocresol foi autoclavado a 116 durante 20 minutos e depois utilizado (tal como o tubo de teste vendido pela 3M Company, este meio n pode ser utilizado).

(4) Termómetro residual O-150 ° C (calibração exigida pelo serviço de metrologia).

2. Método e resultado

O papel de Bacillus stearothermophilus (doravante referido como o comprimido bacteriano) foi colocado num tubo de ensaio selado com uma pinça estéril. O cartão indicador químico e o termômetro spot são colocados em um tubo de ensaio aberto. Prepare 5-10 partes de cada um dos dois tubos acima. Coloque-os na porta de vapor da autoclave, na porta de exaustão inferior e na saída de água inferior ou no centro da parte superior, inferior, esquerda e direita. Se o esterilizador está no segundo andar, você precisa colocar 10 lugares.

O termômetro restante pode ser usado para teste de verificação depois de padronizado. Antes do teste, a coluna de mercúrio do termômetro deve ser esmagada abaixo de 40 ° C. A diferença de temperatura do termômetro após cada monitoração deve estar entre 1 ° C, indicando que a distribuição de temperatura dentro do esterilizador é uniforme.

A placa esterilizada deve ser cultivada a 56-60 ° C durante 24-48 horas sob condições assépticas estéreis sob meio de água purificada com bromocresol esterilizado para observar a alteração da cor. Se o meio ficar amarelo, o B. stearothermophilus no comprimido não é completamente inativado, e as bactérias ainda podem crescer no meio, e a glicose é decomposta para produzir ácido a amarelo. Se a cor do meio não mudar, ainda é púrpura, indicando que os esporos foram inativados. Ao mesmo tempo, papel não esterilizado foi colocado no meio como um controle positivo, e meio em branco sem papel foi usado como um controle negativo.

A cor do indicador no cartão indicador químico muda de amarelo claro para preto durante a autoclavagem. À medida que a cor muda em profundidade e é comparada com a cor de controle, pode-se julgar se o efeito de esterilização atende aos requisitos. O cartão indicador químico deve ser armazenado em local seco. Ele mudará de cor quando exposto à umidade, o que afetará a observação do efeito de esterilização.

A esterilização a vapor de alta pressão deve permitir que o vapor entre no esterilizador sem problemas, entre em contato com os itens esterilizados e descarregue o ar frio original para obter o efeito de esterilização. A distribuição de calor sem carga e a verificação de penetração térmica a plena carga devem ser realizadas (não mais de 2/3 do volume total em carga máxima). As duas verificações foram repetidas três vezes para um total de seis vezes.

Cinco pontos e seis testes mostraram que a temperatura estava em 121 ° C, o cartão indicador químico ficou preto, o grau foi consistente com a cor de controle, o meio não mudou de cor, indicando que o efeito de esterilização a vapor de alta pressão foi qualificado.

Autoclaves são instrumentos poderosos, mas inspeções fortes são apenas um exame dos parâmetros físicos do instrumento. Portanto, o esterilizador que foi submetido a uma forte inspeção também deve verificar o efeito da esterilização. Algumas unidades muitas vezes ignoram essa questão importante. Nos esterilizadores portáteis domésticos, o ponteiro do instrumento atinge frequentemente a temperatura necessária, mas a temperatura real do artigo esterilizado não cumpre os requisitos. Levar a itens esterilizados não é completo, afetando os resultados do experimento. O meio não é completamente esterilizado, afetando o uso do meio e julgando os resultados. Portanto, a verificação do efeito asséptico da autoclave é um problema que deve ser levado a sério.

Ao usar um esterilizador a vapor de alta pressão, primeiro tome cuidado para remover o ar frio do esterilizador enquanto abre o vapor. O orifício de ventilação deve estar fechado antes de todo o ar frio da unidade ter sido removido.

Se restar ar no esterilizador, o manômetro alcançou um certo valor de pressão, mas a temperatura dentro do dispositivo não atingiu o grau correspondente. Quanto mais ar permanecer, maior a diferença entre os dois, a temperatura dentro do aparelho é insuficiente e a esterilização não está completa. (Muitas pessoas terão bolhas no pequeno cateter quando forem esterilizadas no meio de fermentação. Também pode ser possível tentar descarregar mais ar frio do esterilizador. Tem um efeito milagroso).

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