Qual é a diferença entre PCR de fluorescência isotérmica e PCR em tempo real

Método de amplificação:

PCR de fluorescência isotérmica: Na PCR de fluorescência isotérmica, a amplificação do DNA ocorre a uma temperatura constante. Isto significa que a reação ocorre a uma temperatura única e constante durante todo o processo.

PCR em tempo real: PCR em tempo real, também conhecido como PCR quantitativo (qPCR), utiliza um processo de ciclagem térmica. Envolve vários ciclos de temperatura, incluindo etapas de desnaturação, recozimento e extensão. Esses ciclos de temperatura são normalmente controlados por uma máquina termocicladora.

Controle de temperatura:

PCR de fluorescência isotérmica: Como o nome sugere, a PCR de fluorescência isotérmica mantém uma temperatura constante durante a reação, normalmente em torno de 60-65 ℃. Isto simplifica o equipamento necessário para a reação em comparação com a PCR em tempo real.

PCR em tempo real: PCR em tempo real envolve ciclagem térmica, onde a temperatura é alterada repetidamente entre diferentes níveis (por exemplo, desnaturação em torno de 95°C, recozimento em torno de 55-65°C e extensão em torno de 72°C). Isso requer um termociclador com controle preciso de temperatura.

Método de detecção:

PCR de fluorescência isotérmica: A detecção de fluorescência é usada tanto em PCR de fluorescência isotérmica quanto em PCR em tempo real. No entanto, na PCR de fluorescência isotérmica, os sinais de fluorescência são normalmente detectados continuamente sem a necessidade de alternar entre diferentes etapas de temperatura.

PCR em tempo real: Na PCR em tempo real, os sinais de fluorescência são medidos após cada ciclo de mudança de temperatura (normalmente após a etapa de recozimento/extensão). Isto permite o monitoramento em tempo real da amplificação do DNA à medida que ocorre durante o processo de ciclagem térmica.

Formulários:

PCR de fluorescência isotérmica: Esta técnica é adequada para determinadas aplicações, como testes rápidos no local de atendimento, onde a simplicidade e a velocidade são essenciais. Pode ser usado para detecção qualitativa de sequências específicas de DNA.

PCR em tempo real: A PCR em tempo real é amplamente utilizada para análises qualitativas e quantitativas de DNA. É altamente sensível e permite a medição da quantidade inicial de DNA em uma amostra, tornando-o útil para aplicações como análise de expressão gênica, quantificação de carga viral e genotipagem.

Em resumo, a principal diferença entre PCR de fluorescência isotérmica e PCR em tempo real é o método de controle de temperatura e amplificação. A PCR de fluorescência isotérmica mantém uma temperatura constante durante toda a reação e é adequada para aplicações mais simples e rápidas, enquanto a PCR em tempo real envolve ciclagem térmica e é usada para uma ampla gama de aplicações de análise quantitativa e qualitativa de DNA.