Síntese e Clivagem de Polipeptídeo em Fase Sólida
Figura 1 Diagrama esquemático do polipeptídeo de fase sólida
Em 1963, Merrifield propôs um método de síntese de peptídeos em fase sólida, que abriu um amplo espaço para a pesquisa de peptídeos e promoveu grandemente o desenvolvimento da biologia molecular e outros campos. Por esta razão, Merrifield foi agraciado com o Prêmio Nobel de Química em 1984.
Desde a década de 1990, com o amadurecimento gradual da tecnologia de síntese de polipeptídeos, mais e mais polipeptídeos ativos foram desenvolvidos e amplamente aplicados nos campos da medicina, alimentos, cosméticos, agricultura, pecuária e assim por diante. O método de síntese de polipeptídeos em fase sólida também tem sido amplamente utilizado. Neste artigo, a síntese em fase sólida e a clivagem de peptídeos são introduzidas de acordo com o Reator de Síntese de Peptídeos em Fase Sólida.
Figura 2 Aplicação em campo do reator de síntese de polipeptídeos em fase sólida completa
I. Quebra de resina
eu. Alimentação
Adicionando resina em uma síntese de fase sólida, adicionando DCM para dilatação, drenagem, adicione DMF para lavagem, após a lavagem, drenagem para espera.
ii. Condensação
Dissolver o aminoácido em um certo volume de DMF, adicionar um agente de condensação para ativação, colocar em um sintetizador de fase sólida, suplementar DMF à concentração da reação e agitar para a reação.
iii. Remoção do grupo protetorO grau de reação foi detectado com reagente Kaiser. Após a conclusão da reação, o solvente foi bombeado, seguido de lavagem com DMF. A solução PIP/DMF foi adicionada para remover o grupo protetor. O grau de reação foi detectado com reagente Kaiser. Após a conclusão da reação, o solvente foi bombeado, seguido de lavagem com DMF, na qual o próximo aminoácido foi adicionado.
iv. Ciclo de condensação
Conectando sequencialmente os aminoácidos de acordo com a sequência da resina, realizando a operação do ciclo de condensação de acordo com as etapas de “desproteção-lavagem-ativação de aminoácidos-alimentação-lavagem de condensação” e completando a condensação dos n aminoácidos restantes de acordo com a sequência de aminoácidos .
eu. Descarga
Após a síntese, a resina foi lavada com IPA e DCM para completar a contração da resina e a descarga para a bandeja de aço inoxidável.
ii. Secagem de resina
Secagem da resina em estufa de secagem a vácuo em temperatura ambiente, pesagem após secagem e cálculo do rendimento.
iii. Recuperação de líquidos de resíduos orgânicos, tratamento centralizado.
4. Limpeza
O operador deve limpar o local a tempo após a operação.
I. Quebra de resina
eu. Preparação líquida
Prepare essa solução de lise de acordo com a proporção de componentes da solução de lise e coloque a solução de lise em um freezer para armazenamento a frio com antecedência.
ii. Alimentação
Adição de resina peptídica em uma chaleira de reação, adição de líquido de craqueamento pré-resfriado e agitação para reação.
iii. Descarga
Descarregar essa solução de reação após o craqueamento, filtrar para remover a resina e lavar com TFA.
4. Concentração
Transfira esse líquido rachado para um evaporador rotativo para concentração em um pequeno volume à temperatura ambiente.
v. Precipitação
A solução de reação concentrada é vertida em éter metil terc-butílico pré-arrefecido (abreviado como éter) e agitada para precipitar uma grande quantidade de sólidos.
vi. Centrifugação
O líquido turvo é centrifugado e lavado com éter pré-arrefecido.
eu. Secagem de peptídeos brutos
O peptídeo bruto purificado foi transferido para uma estufa de secagem a vácuo para secagem à temperatura ambiente.
ii. Recuperação de líquidos de resíduos orgânicos, tratamento centralizado.
iii. Limpeza
O operador deve limpar o local a tempo após a operação.
Figura 3 Chaleira de clivagem de polipeptídeo de fase sólida de conjunto completo
No processo de produção real, o peptídeo bruto craqueado também precisa ser submetido a processos como purificação, concentração, filtração e liofilização, que não serão descritos em detalhes neste artigo.
Atualmente, o processo de síntese de cadeias peptídicas mais curtas está relativamente maduro, enquanto para substâncias proteicas com maior massa molecular e cadeias peptídicas mais longas, a tecnologia de síntese em fase sólida apresenta algumas limitações e, entretanto, há problemas como alto custo e acompanhada de reações colaterais. Portanto, com base na síntese de peptídeos em fase sólida, novas formas ainda precisam ser encontradas.
